Lộ trình cụ thể như sau:

Lộ trình chạy cự ly 5km: Xuất phát tại Cung Văn hóa Lao động đường Nguyễn Thị Minh Khai đường Phạm Ngọc Thạch đường Công Xã Paris đường Đồng Khởi đường Tôn Đức Thắng đường Nguyễn Huệ đường Lê Thánh Tôn đường Trương Định đường Nguyễn Du đường Cách Mạng Tháng Tám đường Nguyễn Thị Minh Khai về đích tại Cung Văn hóa Lao động.

Lộ trình chạy cự ly 10 km: Xuất phát tại Cung Văn hóa Lao động đường Nguyễn Thị Minh Khai đường Phạm Ngọc Thạch đường Công Xã Paris đường Đồng Khởi đường Tôn Đức Thắng đường Nguyễn Huệ đường Lê Thánh Tôn đường Lê Anh Xuân đường Phạm Hồng Thái đường Lê Lai đường Hàm Nghi đường Tôn Thất Đạm đường Võ Văn Kiệt Tôn Đức Thắng đường Lê Duẩn đường Nam Kỳ Khởi Nghĩa đường Nguyễn Du đường Cách Mạng Tháng Tám đường Nguyễn Thị Minh Khai về đích tại Cung Văn hóa Lao động.

Lộ trình chạy cự ly 21 km: Xuất phát tại Cung Văn hóa Lao động đường Nguyễn Thị Minh Khai đường Phạm Ngọc Thạch đường Công Xã Paris đường Đồng Khởi đường Tôn Đức Thắng đường Nguyễn Huệ đường Lê Thánh Tôn đường Lê Anh Xuân đường Phạm Hồng Thái đường Lê Lai đường Hàm Nghi đường Tôn Thất Đạm đường Võ Văn Kiệt (phần đường hỗn hợp phía nhà dân) quay đầu tại khu vực giao lộ Võ Văn Kiệt – Trần Bình Trọng đường Tôn Đức Thắng cầu Ba Son đường R12 đường Tố Hữu đường Nguyễn Cơ Thạch cầu Thủ Thiêm đường Nguyễn Hữu Cảnh đường Nguyễn Bỉnh Khiêm đường Lê Duẩn đường Nam Kỳ Khởi Nghĩa đường Nguyễn Du đường Cách Mạng Tháng Tám đường Nguyễn Thị Minh Khai về đích tại Cung Văn hóa Lao động.

Lộ trình lưu thông thay thế: Các loại xe lưu thông trên phần đường còn lại theo hướng dẫn của lực lượng chức năng.

Sở GTVT TP lưu ý, người điều khiển phương tiện khi lưu thông qua khu vực tổ chức Giải chạy đêm TP.HCM năm 2023 – HOCHIMINH CITY NIGHT RUN 2023 cần giảm tốc độ và chấp hành theo hướng dẫn của lực lượng điều tiết giao thông, cảnh sát giao thông hoặc hệ thống báo hiệu giao thông trên đường.